描述
核酸染料使用方法
核酸染料采用瓊脂糖電泳檢測(cè)DNA時(shí),GoldView II與核酸結(jié)合后能產(chǎn)生很強(qiáng)的熒光信號(hào),其靈敏度比EB強(qiáng)5-10倍,使用方法與之*相同。GoldView II與核酸結(jié)合后,大吸收峰為497nm,另外,其在254nm處也有一強(qiáng)吸收峰,發(fā)射波長(zhǎng)為520nm,在紫外透射光下雙鏈DNA呈現(xiàn)綠色熒光,而且也可用于染RNA。
通過(guò)Ames試驗(yàn)、小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核試驗(yàn)、小鼠睪丸精母細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn),致突變性結(jié)果均為陰性;而溴化乙錠(EB)是一種強(qiáng)致癌劑。因此用Goldview II代替EB不失為一種明智的選擇。
核酸染料為DMSO溶解,低溫時(shí)為固體狀態(tài),溫度到達(dá)20℃以上即可融化。
核酸染料使用方法:
由于GoldView II敏感度比EB高數(shù)倍,使用時(shí),請(qǐng)將商品化的Marker用1×DNA Loading Buffer作5-10倍的稀釋,上樣1-10µl,以得到較好的結(jié)果(通常稀釋10倍后上樣5ul)。對(duì)于待檢測(cè)樣品,通常僅需1-2µl即可。如果濃度較高,也須作一定倍數(shù)稀釋,否則會(huì)造成條帶不整,影響遷移速率。凝膠回收請(qǐng)選擇點(diǎn)染方法。
1.將50ml瓊脂糖凝膠溶液(濃度一般為0.8%~2%)在微波爐中融化。
2.冷卻至不燙手時(shí)加入10-15µl GoldView II(不能少于10ul),輕輕搖勻,避免產(chǎn)生氣泡。
3.倒膠,待瓊脂糖凝膠*凝固后上樣電泳。
4.電泳完畢在紫外燈下觀察。若使用數(shù)碼相機(jī)照像記錄,則關(guān)閉相機(jī)的閃光燈,放在自動(dòng)檔即可;若使用凝膠成像系統(tǒng)照相,通過(guò)調(diào)節(jié)光圈、曝光時(shí)間,選擇合適的濾光片,可得到成像清晰的照片。
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